Symansis的产品怎么样与其他供应商提供的不同？针对大肠杆菌表达的细胞因子产生的抗体能否识别 Symansis 人表达的细胞因子？什么是 Fc 融合蛋白，为什么要使用它们？二维密度图像是如何制作的？

我应该用什么重悬缓冲?为保持最佳的长期生物活性而推荐的储存条件是什么？所有产品都经过灭菌吗？产品是否含有载体或任何其他添加剂？

理论分子量和obs有什么区别计算的分子量？理论 pI 和观察到的 pI 之间有什么区别？为什么 2D 凝胶显示我的蛋白质有多个点？为什么用 PNGase F 处理后蛋白质 MW 会发生变化？你怎么知道蛋白质有 N- linked glycans？使用的糖苷酶混合物是什么？为什么观察到的分子量范围不是精确值？为什么 1D 凝胶条带很宽？为什么使用糖苷酶混合物？如何知道蛋白质具有 O-linked glycans？

什么是Symansis 的人类细胞表达 ELISA 标准品的优势？我是否必须一式两份运行我的所有标准品和样品？我必须一次运行我的所有样品吗？通过测定获得什么类型的可重现结果？什么存储试剂盒或产品需要什么条件？是否可以储存指定以外的试剂？我应该如何储存我的样品？有多少样品每个试剂盒都会运行吗？我可以修改方案吗？我每次都必须运行空白或零标准吗？我可以改变我在测定中使用的样品体积吗？如果试剂体积不够，我该怎么办？可以使用来自不同试剂盒的成分吗？我可以储存稀释的标准品并再次使用吗？我可以制作自己的标准曲线吗？你建议我如何清洗我的盘子？我需要使用平板摇床吗？我可以使用轨道瓶摇床而不是板摇床？为什么我必须使用 450-570nm 之间的波长校正？如果我提取我的样品，我是否仍需要遵循试剂盒插页中给出的推荐稀释度？分析物的预期浓度是多少我应该期望找到什么？我的光密度比我的套件随附的包装插页中的光密度高（或低）一点。为什么？在 ELISA 缓冲液中，牛血清白蛋白 (BSA) 可以用胎牛血清 (FBS) 等其他物质代替吗？我的样品在组织培养基中；我需要稀释我的标准吗在同一培养基中？捕获抗体包被的板可以存放多长时间？背景高的原因是什么？标准曲线不正确的原因是什么？没有显色的原因是什么？背景高的原因是什么测定内变异系数 (CV)（数据变异）？什么时候使用化学发光免疫测定而不是 ELISA 更合适？如果我没有获得好的结果或遇到困难怎么办？为什么 Symansis 产品在定量方面更敏感涉及天然人类蛋白质的免疫测定？

Symansis 的产品与其他供应商提供的产品有何不同？Symansis 的产品由人类细胞表达，而不是大肠杆菌、CHO 或昆虫细胞。来自人类细胞的表达促进翻译后修饰 (PTM)，例如 p 的磷酸化和糖基化肽骨干。 PTM 可能影响蛋白质稳定性、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质折叠和抗原性。非人类表达系统不会添加某些 PTM，并且可能会错误地添加其他 PTM（例如，已知昆虫细胞过度糖基化外源表达的蛋白质）。从人类细胞中表达人类细胞因子可确保蛋白质更接近于自然产生的细胞因子。有关此区域的更多信息，请访问我们的资源中心页面。顶部

针对大肠杆菌表达的细胞因子产生的抗体会识别 Symansis 人表达的细胞因子吗？Symansis 的细胞因子不同于我们的竞争对手，因为细胞因子是从人类细胞中表达的。这意味着细胞因子具有人类翻译后修饰，例如糖基化。抗体结合位点可能被糖蛋白掩盖秒。糖基化还可以促进蛋白质折叠成更稳定的状态，内化抗体结合位点（针对大肠杆菌表达的细胞因子的抗体）。从 NSO、CHO 或昆虫细胞（例如 Sf21 细胞）重组表达人细胞因子也有助于糖基化，但这些表达系统可能会添加与天然存在的细胞因子不同的聚糖结构。预计 Symansis 的人表达细胞因子将与使用不同表达系统（如大肠杆菌或 CHO）表达的细胞因子表现不同。观察到的确切差异取决于抗体是单克隆抗体还是多克隆抗体，以及抗体识别的表位。无论如何，人们认为 Symansis 细胞因子的行为更接近于自然产生的人类细胞因子。顶部

什么是Fc融合pr蛋白以及为什么使用它们？细胞因子，特别是细胞因子受体的细胞外结构域可以表达为 Fc 融合蛋白。 Fc 区包含铰链区以及人 IgG1 的 CH2 和 CH3 结构域。 Fc 结构域通过形成二硫键促进融合蛋白的二聚化。这反过来将大大增加蛋白质相对于单体受体形式的中和能力。此外，已知 Fc 融合蛋白在体内表现出增加的半衰期。 Fc 融合蛋白的表达可以增加特定受体相对于可溶性单体的结合亲和力。这为受体-Fc 二聚体提供了许多优于相应的单体受体等价物（例如可溶性白细胞介素受体单体）的优势。优势包括延长蛋白质半衰期、增加配体结合亲和力以及最大限度地减少天然膜结合受体复合物。顶部

二维密度图像是如何制作的？Symansis 产品聚焦于 pH 3-10 梯度 IPG 胶条，然后在线性梯度 SDS-PAGE 凝胶上运行以及一组分子量标记。凝胶使用染色深紫色或考马斯蓝蛋白质染色。使用 ImageJ 软件 (http://rsb.info.nih.gov/ij/) 分析 2D 凝胶上可见蛋白质斑点的相对强度。凝胶选定区域内的斑点，并使用凝胶的适当空白区域（缺少蛋白质斑点的区域）进行背景减法。对每个感兴趣的蛋白质斑点进行体积积分，并从中获得质心及其计算相对百分比强度。通过将它们与精确 MW mar 的位置进行比较，确定各个点的分子量和 pI 值kers和线性IGP条带。前者适用于具有 4 阶多项式的指数函数，以在 MW 标记位置之间准确插入蛋白质点位置。每个蛋白质点对应于 Symansis 产品的独特亚型。顶部

重建和使用

我应该使用什么重悬缓冲液？我们建议将每个冻干细胞因子重悬于 500ul 1 x 无菌 PBS 中.如果细胞因子要长期保存，建议浓度不低于100ug/ml。Top

为维持最佳的长期生物活性，推荐的储存条件是什么？我们的产品经过冻干处理，可在一定范围内提供稳定性温度。但是我们建议长期存储 of 在 -20oC 下冻干产品。当细胞因子重新悬浮后，我们建议在 2-8o C 下短期储存。对于长期储存，我们建议将溶液等分到一次性小瓶中（以避免反复冻融循环）并将小瓶储存在 -20o C 下，或 -80o CTop

所有产品均无菌供应吗？所有产品均无菌供应，适用于组织培养或其他无菌环境。顶部

产品是否含有载体或任何其他添加剂？Symansis的细胞因子与载体蛋白一起配制，以增强产品的稳定性。我们也可应要求提供无载体细胞因子。如果您有兴趣购买无载体细胞因子，请发送电子邮件[电子邮件保护]概述您对哪些细胞因子感兴趣免费采购运营商，数量是多少。我们会尽快与您联系，尽快将产品交付给您。Top

SUGAR STRUCTURE

理论分子量和观察到的分子量有什么区别？理论分子量是根据氨基酸序列计算的成熟的蛋白质。理论分子量仅考虑去除信号肽和任何前肽后的蛋白质骨架，不包括蛋白质生产过程中可能发生的任何翻译后修饰 (PTM)。大多数 PTM 对整体蛋白质的分子量 (MW) 贡献不大。例如，磷酸基团的分子量为 80 Da，乙酰化增加了 40 Da。例外情况是糖基化、脂化和泛素的添加。由于 Sym 的所有产品ansis 是可溶的，脂化和泛素添加可以忽略不计。 Symansis 蛋白在人体细胞外表达，有助于将寡糖（聚糖）添加到蛋白质骨架中。聚糖与蛋白质主链的连接使观察到的分子量增加到理论分子量以上。大多数 N-连接聚糖结构的 MW 大于 2 kDa。如果蛋白质上有3个被占据的N-聚糖位点，蛋白质的MW可以增加6-10 kDa以上。因此，理论分子量与观察到的分子量之间的差异可用于推导细胞因子的估计糖基化百分比。顶部

理论pI和观察到的pI有什么区别？理论pI通常是根据成熟的氨基酸序列计算的蛋白质。观察到的 pI 因 po 而不同st 翻译修饰 (PTM)，包括磷酸化和唾液酸化。例如，IL-10 的理论 pI 约为 7.9。当磷酸基团添加到丝氨酸或苏氨酸残基时，理论 pI 变为 7.1。 *pI 使用 ProMOST (http://proteomics.mcw.edu/promost/)计算 Top

为什么 2D 凝胶显示我的蛋白质有多个点？多个点是由于翻译后修饰 (PTM) 和/或蛋白水解加工产生的不同蛋白质亚型所致.不是蛋白质杂质。Top

为什么用 PNGase F 处理后蛋白质 MW 发生变化？N-连接的聚糖被 PNGase F 处理去除。 MW 的下降表明蛋白质是 N-糖基化的。顶部

你怎么知道蛋白质有 N-连接聚糖？用 PNGase F 处理后 MW 下降表示存在 N-连接聚糖。顶部

使用的糖苷酶混合物是什么？用于去除 N-连接和 O-连接聚糖的糖苷酶混合物由 PNGase F、唾液酸酶 A（神经氨酸酶）、O-聚糖酶、β-1,4-半乳糖苷酶和β-N组成-乙酰葡糖胺酶。样品在酶混合物中在 370C 下孵育 3 小时。顶部

为什么观察到的分子量范围不是精确值？具有翻译后修饰的蛋白质，特别是糖基化，在 SDS-PAGE 上显示为宽带。观察到的分子量表示是从校准的 SDS-PAGE 凝胶中测量的gainst 分子量标准.Top

为什么 1D 凝胶条带很宽？由于存在不同的亚型和糖型，具有翻译后修饰（尤其是糖基化）的蛋白质在 SDS-PAGE 上显示为宽带。顶部

为什么要使用糖苷酶混合物？没有酶可以去除所有 O-连接聚糖。 O-聚糖酶仅去除简单的 O-连接聚糖。向混合物中添加其他糖苷酶可确保将任何延长的 O-连接聚糖修剪回 O-聚糖酶可以去除的简单结构。顶部

你怎么知道蛋白质有O-连接聚糖？糖处理后MW下降糖苷酶混合物表示存在 N-连接和/或 O-连接聚糖。如果观察到的用糖苷酶混合物处理的蛋白质的 MW 低于观察到的用 PNGase F 处理的蛋白质的 MW，则该蛋白质是 O-糖基化的。顶部

ELISA

Symansis的人细胞表达ELISA有什么优势标准？它们更准确地与人血清或源自人细胞的细胞培养物上清液中的细胞因子水平相关。顶部

我是否必须一式两份地运行我所有的标准品和样本？是的，运行一式两份是为了监测测定精度并提高对测定的信心results obtained.Top

我必须一次运行我的所有样品吗？不，每个试剂盒都带有每个组分的单个小瓶，可以等分和储存。这允许用户在不同时间分析不同数量的样品，只需用捕获抗体包被必要数量的微量滴定板孔。顶部

通过检测获得了哪些类型的可重现结果？每个试剂盒都附带一个包含典型数据图表的包装插页获得。该数据将根据孵育的时间和温度而变化。然而，图表上的误差条表示在重复数据点中获得的典型误差。顶部

试剂盒或产品需要什么样的储存条件？每个试剂盒的标签上都标明了储存温度。一旦试剂盒成分重新配制用水或包装插页中指定的缓冲液稀释后，它们应冷冻储存在 -20oC 和 -80oC 之间，分成小等分试样以消除多次冷冻/解冻循环的需要。顶部

是否可以储存指示以外的试剂？储存试剂不建议在指定条件以外的条件下使用套件组件，以确保测试的正确性能。顶部

我应该如何储存我的样品？样品应该储存在-20oC或更低的温度下。长期保存建议冷冻在-70oC -80oC.Top

每个试剂盒将运行多少个样本？每个试剂盒提供足够的试剂至少运行 15 个96 孔微量滴定板，36 个样品一式两份，取决于标准曲线使用的标准数量。顶部

我可以修改协议吗？Symansis 的工具包已经过优化以提供最好的结果。修改格式或协议可能会产生与 Package Insert.Top 上显示的结果不同的结果

我每次都必须运行空白或零标准吗？是的，这些是计算所必需的，并反映了每天细微但显着的性能变化和化验来化验。在解决特定分析问题的根源时，它们也非常有用。顶部

我可以改变样本的体积吗我在测定中使用的 le？不建议您更改体积，因为所有 Symansis 的试剂盒都是为在给定体积下实现最佳性能而设计的顶部

试剂量不够怎么办？如果是小量试剂，比如分装试剂，使用前离心小瓶以收集小瓶底部的所有内容物。顶部

是否可以使用来自不同套件的组件？每个套件包含具有特定批号的组件，以确保所有组件单独以及与所有其他组件一起发挥最佳性能套件中的组件。对这些特定批次进行 QC 测试。绝不建议使用您自己的组件或来自其他套件或供应商的组件。返回顶部

我可以储存稀释后的标准品并再次使用吗？不可以，我们建议您在执行检测所需的时间内（通常是一天）使用稀释后的标准品。顶部

我是否制定自己的标准曲线？是的，您可以根据试剂盒的推荐范围稀释提供的标准品，在包装说明书中创建自己的标准曲线。顶部

您建议我如何洗板？如果您使用的是自动洗板机，我们建议定期检查校准，并在清洗前用洗板缓冲液冲洗系统。同样如此对于手动洗衣机。也可以使用中继器或洗瓶。用户应小心以确保吸出所有内容物并将板在无绒纸上拍干。顶部

我需要使用摇板器吗？不用摇板器也能得到可靠的结果，但 O.D. 通常会低于使用摇板器获得的结果plate shaker.Top

我可以使用定轨摇瓶代替平板摇床吗？如果微量滴定板牢固固定并且摇床设置在足够低的速度以确保孔中的内容物不会弹出，则可以使用定轨摇瓶。顶部< /p>

为什么我必须使用 450-570nm 之间的波长校正？对于 ELISA 测定，在双波长下进行读数以校正光密度由塑料井、灯和光学波动贡献。顶部

如果我提取样品，我是否仍需要遵循试剂盒说明书中给出的推荐稀释度？提取程序后所需的样品稀释量会受到纯化效果的影响和集中在所使用的协议中。稀释或浓缩的量必须由最终用户决定。顶部

我应该期望找到的分析物的预期浓度是多少？给定分析物的量不仅因物种而异，而且在组织和组织之间也可能不同细胞来源。此信息的最佳来源是当前的文献，可以通过 Internet 在多个科学数据库中轻松访问这些文献。返回页首

我的光密度有点高于（或低于）我的套件随附的包装插页中的值。为什么？光密度受许多物理条件的影响，例如时间和温度。我们建议您缩短或延长与底物溶液的最终孵育以补偿。顶部

在 ELISA 缓冲液中，牛血清白蛋白 (BSA) 可以用胎牛血清 (FBS) 等其他物质代替吗？可以，1% BSA 可以用 10 % FBS 用于板封闭。在含有 10% FBS 的缓冲液中稀释标准品、血清样品和检测抗体可能更适合检测血清样品或组织培养液。顶部

我的样本在组织培养基中；我是否需要在相同的培养基中稀释我的标准品？是的，如果您不想用检测缓冲液稀释组织培养基。您的标准品必须稀释到大约相同的培养基中您的样品。但是，使用培养基作为稀释剂可能会导致您的标准曲线相对于您在试剂盒中收到的包装插页中描述的图表有所下降。顶部

捕获抗体包被的板可以存放多长时间？已经包被捕获抗体的 ELISA 板可在 4°C 下最多存放 3 天。在存放期间，板应密封并含有封闭剂缓冲液或检测缓冲液（例如 PBS 中的 1% BSA 或 PBS 中的 10% FBS）。顶部

是什么原因背景高？洗涤不当：洗涤不充分，或其中一个洗涤步骤的遗漏会导致背景高。检查洗涤缓冲液储液罐的体积，并确保执行所有推荐的洗涤步骤。受污染的底物：使用前确保底物没有被金属离子或氧化剂污染。在 ELISA 底物开发期间单独保存额外的底物溶液。在此期间，底物溶液不应自行显色。受污染的稀释剂：大多数测定稀释剂都是基于蛋白质基质，这会导致微生物的生长。仅使用无菌移液器从存储容器中取出所需的稀释剂。暴露在光线下的基材：暴露在光线下可能会导致基材呈蓝色。将溶液保存在黑暗中（小瓶），直到准备好分配到板中。偶联物稀释错误：确保根据包装说明书中的指南稀释偶联物。太高了偶联物的浓度可能会导致背景升高。错误的孵育时间/温度：通常遵循有关孵育时间和温度的测试方案。然而，如果在标准稀释系列中所有的孔都被强烈且均匀地着色而没有观察到强度梯度，那么可能需要随着颜色的发展观察底物反应，以便更快地停止反应。返回顶部

标准曲线不正确的原因是什么?冻干标准品的重构体积错误：确保冻干粉在正确的体积和正确的缓冲液（去离子水或蒸馏水和 0.05% NaN3）中重构。重组缓冲液和体积在包装说明书中给出。重构时间太短：确保重构过程有足够的时间让成分完全溶解冻干粉。浓缩原液标准稀释错误：确保所提供的浓缩原液标准已按照包装说明书中指示的范围进行了稀释。储备材料的错误储存：标准储备溶液的储存条件在包装说明书中给出。严格遵循这些准则。标准污染：应通过使用无菌移液器和适当储存来避免标准污染。标准稀释步骤中混合不当：在制备浓缩标准的系列稀释液时，确保在每个稀释步骤中都进行了适当的混合。错误的测量波长：确保使用的读板器已调整到正确的波长。请检查参考波长。使用不同批次的标准品：仅使用同一试剂盒中提供的标准品进行检测。不要用其他套件替换标准。顶部

不显色的原因是什么？开始测试时试剂未处于室温：在进行测试之前将所有试剂置于室温。 个别试剂的不正确储存：所有试剂盒组分的储存条件在包装插页中给出。遵循这些指南。 HRP-结合物污染：确保底物在使用前没有受到污染。 HRP-结合物稀释错误：如果浓缩的结合物稀释到太低的浓度，显色会很弱。遵循指南测试包装说明书中的线条。2 组分 TMB 未正确混合：如果使用 2 组分 TMB 底物混合物，请按照供应商提供的 TMB 底物混合比例进行操作。确保在使用前正确混合各组分。遗漏任何孵育步骤：确保执行测试方案的每个步骤。微孔在洗涤后或储存期间干燥：w灰化，在吸水垫或纸巾上轻敲微量滴定板以去除多余的洗涤缓冲液。洗涤后立即使用微量滴定板或倒置在湿吸水纸上不超过 15 分钟。不要让水井变干。在清洗/移液过程中通过刮擦去除涂层：在清洗板或移液标准品和样品时注意不要刮擦微孔的内表面。样品不适合或太稀不适合测试：检查样品是否适合（例如与测试缓冲液兼容）测试或测定条件，并且它们没有被过度稀释。顶部

Intra Assay Coefficient of Variation (CV)高的原因是什么（数据变化）？在洗涤/移液过程中通过刮擦去除涂层：在洗涤板或移液标准品和样品时注意不要刮伤微孔的内表面es。通过剥离板盖从孔到孔交叉污染：孵育后小心地剥离板盖，以避免从一个孔到另一个孔的交叉污染。非均质样品：确保您用于测试的样品是均质的。在添加到板之前将它们混合，以避免因冷冻/解冻引起的任何梯度。边缘效应：在孵育过程中密封板，如果可能的话在振荡器上孵育。使用的移液器未正确校准：确保您使用的移液器已正确校准。顶部

什么时候使用化学发光免疫测定而不是 ELISA 更合适？化学发光免疫测定是一种更灵敏的测定，通常仅在样品中含有非常低浓度的低于 ELISA 检测水平的分析物。顶部

如果我没有获得好的结果或遇到困难怎么办？联系我们（或发送电子邮件至 [email protected]）以获得技术支持。顶部

为什么 Symansis 产品在涉及天然人类蛋白质的定量免疫测定中具有更敏感的标准？Symansis 细胞因子由人类细胞表达并具有模仿天然存在的人类细胞因子的翻译后修饰。ELISA 等定量免疫测定使用针对目标细胞因子的抗体对样品进行定量。如果抗体是针对大肠杆菌或 CHO 细胞表达的细胞因子产生的，抗体可能会识别正常糖基化的区域，当蛋白质正确折叠时，该区域通常会被内化。因此，当蛋白质正确折叠时，可能会出现不准确的情况使用非人类细胞表达的标准品（例如从 E.大肠杆菌）来定量天然人类蛋白质。如果由于缺乏人类特定的翻译后修饰而导致标准蛋白上不存在抗原表位，则非人类细胞表达的标准可能会高估自然产生的细胞因子。相反，如果抗体针对通常不会暴露在天然人类蛋白质上的区域，则非人类细胞表达的标准可能会低估天然存在的细胞因子。 Symansis 提供 ELISA 试剂盒，其中含有从人类细胞表达的细胞因子，以促进标准曲线的生成，从而更准确地定量天然存在的细胞因子。